Cargando el modelo
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1 / 8 Un tramo de ADN a escala Son 44 pares de bases de ADN, unos 15 nm de largo. Las barras negras dan la escala: la hélice mide 2 nm de ancho y da una vuelta cada 3,4 nm. La secuencia es un ejemplo inventado para el modelo.
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Guía Piezas Controles
01 Un tramo de ADN a escala Son 44 pares de bases de ADN, unos 15 nm de largo. Las barras negras dan la escala: la hélice mide 2 nm de ancho y da una vuelta cada 3,4 nm. La secuencia es un ejemplo inventado para el modelo.
02 De dónde sale la guía Las bacterias guardan trozos de ADN de virus entre repeticiones cortas de su propio genoma, la matriz CRISPR. Cada trozo se copia a un ARN que conduce una proteína Cas hasta el mismo virus si vuelve.
03 Cas9 lleva la guía Cas9 llega sujetando el ARN guía (naranja). La proteína se dibuja transparente para que puedas seguir el ARN. Su extremo de 20 letras es la parte que puedes cambiar en el recuadro bajo el modelo.
04 Primero encuentra un PAM Cas9 solo se agarra al ADN junto a NGG. Aquí el PAM es TGG. Desactiva «PAM (NGG)» en «Controles» y la proteína pasa de largo sin abrir la hélice.
05 La guía se aparea desde el PAM El ADN se abre par de bases a par de bases desde el extremo del PAM, y la guía se aparea con la cadena oscura mientras la gris queda apartada. Escribe otra letra en la guía y el apareamiento se detiene en esa letra.
06 Dos dominios, dos cortes Con las 20 bases apareadas, el dominio HNH (verde) gira hasta su sitio y corta la cadena oscura. RuvC (rosa) corta la gris. Los dos cortes caen 3 pares de bases antes del PAM.
07 Reparación uniendo los extremos Sin molde, la célula vuelve a pegar los extremos. A menudo se añaden o se pierden unas pocas bases; el modelo muestra un par de bases de más, marcado con el anillo.
08 Reparación a partir de un molde Con «Molde de reparación» activado, un trozo de ADN coincidente se coloca junto al corte y la célula lo copia. Tres pares de bases del corte cambian de color a las letras del molde.
Doble hélice de ADN Dos cadenas de azúcar y fosfato enrolladas una sobre otra, de 2 nm de ancho, con una vuelta cada 3,4 nm (10 pares de bases). La cadena gris lleva las mismas letras que la guía; la oscura es la que se aparea con la guía. Pares de bases A se aparea con T y C con G, un par cada 0,34 nm. Colores: A verde, T rojo, G amarillo, C azul y U (en el ARN) morado. Diana (protoespaciador) Los 20 pares de bases que coinciden con la guía. Aquí la guía se aparea con la cadena oscura y la gris queda apartada formando un bucle, el bucle R. PAM (NGG) Tres bases justo después de la diana en la cadena gris: una base cualquiera y luego dos G. Aquí es TGG. Cas9 busca esto primero y solo abre el ADN a su lado. ARN guía Una sola cadena de ARN. Las primeras 20 letras (el espaciador) eligen la diana; el resto (el andamio) sujeta la guía dentro de Cas9. Une en una sola molécula el crRNA y el tracrRNA que usa la bacteria. Lóbulo REC El lóbulo de reconocimiento de Cas9. Sujeta el ARN guía y el par ARN-ADN. Se muestra como una masa blanda, no como la superficie medida. Dominio RuvC Uno de los dos dominios de corte, en el lóbulo nucleasa. Corta la cadena gris, la que no está apareada con la guía. Dominio HNH El otro dominio de corte. Solo gira hasta su sitio cuando la guía se ha apareado a lo largo de la diana; entonces corta la cadena oscura, la apareada con la guía. Dominio de interacción con el PAM La parte de Cas9 que lee el PAM. Dos argininas reconocen el par GG mediante puentes de hidrógeno. Sitio de corte Las dos cadenas se cortan 3 pares de bases antes del PAM, en el mismo lugar, así que los extremos quedan casi siempre romos. Tras el corte, el anillo marca los pares de bases que cambió la reparación. Molde de reparación Un trozo de ADN que coincide con los dos lados del corte y lleva tres pares de bases cambiados. Si está presente, la célula puede copiar el cambio en el sitio de corte. Matriz CRISPR En la bacteria, repeticiones cortas (grises) se alternan con espaciadores (de colores) copiados de virus que la atacaron antes. Cada espaciador se convierte en una guía.
