Carregando o modelo
Este dispositivo não consegue mostrar o modelo 3D. Abaixo, você pode ler as etapas do guia em texto.
1 / 8 Um trecho de DNA em escala São 44 pares de bases de DNA, cerca de 15 nm de comprimento. As barras pretas dão a escala: a hélice tem 2 nm de largura e dá uma volta a cada 3,4 nm. A sequência é um exemplo inventado para o modelo.
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Guia Peças Controles
01 Um trecho de DNA em escala São 44 pares de bases de DNA, cerca de 15 nm de comprimento. As barras pretas dão a escala: a hélice tem 2 nm de largura e dá uma volta a cada 3,4 nm. A sequência é um exemplo inventado para o modelo.
02 De onde vem a guia As bactérias guardam pedaços de DNA de vírus entre repetições curtas do próprio genoma, o arranjo CRISPR. Cada pedaço é copiado em um RNA que leva uma proteína Cas até o mesmo vírus, se ele voltar.
03 A Cas9 carrega a guia A Cas9 chega segurando o RNA guia (laranja). A proteína é desenhada transparente para você acompanhar o RNA. A ponta de 20 letras é a parte que você pode mudar na caixa abaixo do modelo.
04 Primeiro ela encontra um PAM A Cas9 só se prende ao DNA ao lado de NGG. Aqui o PAM é TGG. Desligue "PAM (NGG)" em "Controles" e a proteína passa direto, sem abrir a hélice.
05 A guia pareia a partir do PAM O DNA se abre um par de bases por vez a partir da ponta do PAM, e a guia pareia com a fita escura enquanto a cinza é empurrada para o lado. Digite outra letra na guia e o pareamento para nessa letra.
06 Dois domínios, dois cortes Com as 20 bases pareadas, o domínio HNH (verde) gira para o lugar e corta a fita escura. O RuvC (rosa) corta a cinza. Os dois cortes caem 3 pares de bases antes do PAM.
07 Reparo juntando as pontas Sem molde, a célula cola as pontas de novo. Muitas vezes isso acrescenta ou perde algumas bases; o modelo mostra um par de bases a mais, marcado pelo anel.
08 Reparo a partir de um molde Com "Molde de reparo" ligado, um pedaço de DNA correspondente fica ao lado da quebra e a célula o copia. Três pares de bases no corte mudam de cor para as letras do molde.
Dupla hélice de DNA Duas fitas de açúcar e fosfato enroladas uma na outra, com 2 nm de largura e uma volta a cada 3,4 nm (10 pares de bases). A fita cinza tem as mesmas letras que a guia; a escura é a que pareia com a guia. Pares de bases A pareia com T e C pareia com G, um par a cada 0,34 nm. Cores: A verde, T vermelho, G amarelo, C azul e U (no RNA) roxo. Alvo (protoespaçador) Os 20 pares de bases que combinam com a guia. Aqui a guia pareia com a fita escura e a fita cinza é empurrada para o lado, formando uma alça, a alça R. PAM (NGG) Três bases logo depois do alvo, na fita cinza: uma base qualquer e depois dois G. Aqui é TGG. A Cas9 procura isso primeiro e só abre o DNA ao lado dele. RNA guia Uma única fita de RNA. As primeiras 20 letras (o espaçador) escolhem o alvo; o resto (o arcabouço) prende a guia dentro da Cas9. Ela junta o crRNA e o tracrRNA que a bactéria usa. Lobo REC O lobo de reconhecimento da Cas9. Segura o RNA guia e o par RNA-DNA. Aparece como uma massa macia, não como a superfície medida. Domínio RuvC Um dos dois domínios de corte, no lobo nuclease. Corta a fita cinza, a que não está pareada com a guia. Domínio HNH O outro domínio de corte. Só gira para o lugar quando a guia já pareou ao longo do alvo; então corta a fita escura, a que está pareada com a guia. Domínio de interação com o PAM A parte da Cas9 que lê o PAM. Duas argininas reconhecem o par GG por ligações de hidrogênio. Local do corte As duas fitas são cortadas 3 pares de bases antes do PAM, no mesmo ponto, então as pontas ficam quase sempre cegas. Depois do corte, o anel marca os pares de bases que o reparo mudou. Molde de reparo Um pedaço de DNA que combina com os dois lados do corte e traz três pares de bases alterados. Com ele presente, a célula pode copiar a mudança para o local do corte. Arranjo CRISPR Na bactéria, repetições curtas (cinza) se alternam com espaçadores (coloridos) copiados de vírus que atacaram antes. Cada espaçador vira uma guia.
